Plant Genetic Researches
پژوهش های ژنتیک گیاهی
pgr
Agriculture
http://pgr.lu.ac.ir
1
admin
2383-1367
2676-7309
10.22034/pgr
14
1206
fa
jalali
1393
2
1
gregorian
2014
5
1
1
1
online
1
fulltext
fa
همسانهسازی، انتقال و بیان دائم فیوژن ژنهای اینترفرون گامای انسانی و bar در گیاه توتون
Cloning, Transformation and Stable Expression of a Fusion of Human Interferon Gamma and bar Genes in Tobacco Plant (Nicotiana tobaccum cv. xanthi)
بهنژادی گیاهی
Plant improvement
پژوهشي
Research
تولید پروتئین اینترفرون گامای انسانی در سیستمهای بیانی یوکاریوتی، بهعنوان یک پروتئین نوترکیب درمانی، در مطالعات پزشکی اهمیت بسیاری دارد. ویژگیهای اینترفرون گاما، آن را به یک فاکتور ضد سرطانی مناسب تبدیل کرده است. فسفینوتریسین (PPT) مهارکننده گلوتامین سینتاز است و از گروه علفکشهای غیرانتخابی بیالافوس میباشد. ژن bar کد کننده آنزیم فسفینوتریسین استیل ترانسفراز (PAT) است. این آنزیم باعث ایجاد مقاومت به علفکش فسفینوتریسین میشود و میتواند بهعنوان یک نشانگر انتخابی در گیاهان استفاده شود. در این پژوهش، ژن اینترفرون گامای انسانی و ژن bar بهصورت فیوژن در ناقل بیانی گیاهی pCAMBIA 1305.1 تحت کنترل پیشبرنده CaMV35S و خاتمه دهنده NoS همسانهسازی شد. صحت همسانهسازی فیوژن IFNγ- Barدر ناقل بیانی حاضر با استفاده از تکنیکهای مختلفColony PCR، هضم آنزیمی و توالییابی تأیید شد. سازهی تهیه شده (pCAMBIA1305.1- IFNγ- Bar) با استفاده از روش انجماد و ذوب به اگروباکتریوم سویهی LBA4404 انتقال داده شد و با استفاده از روش دیسک برگی در ژنوم گیاه توتون ادغام شد. گیاهان تراریخته احتمالی در محیط گزینشگر، حاوی 30 میلیگرم در لیتر هیگرومایسین انتخاب شدند. پس از ریشهدار شدن به خاک انتقال یافتند و حضور فیوژن IFNγ- Barدر ژنوم این گیاهان با استفاده از تکنیک PCR تأیید شد. در آنالیز داتبلات نیز حضور پروتئینIFNγ-bar در گیاهان تراریخت توتون تأیید شد.
The production of human gamma interferon in eukaryote expression systems refers as a therapeutic recombinant protein which has significant impact in medical studies. Unique com position of gamma interferon makes such protein as a suitable tool against cancer. It is documented that phosphinothricin (PPT) classified as non-selective herbicide group of bialaphos acts an inhibitor for glutamine synthetase. The bar gene is encoding the phosphinothricin-N-acetyltransferase (PAT) enzyme. This enzyme capable of boosting resistance against PPT herbicide, thus it can be selected as a selective marker within plant population. Then various colony PCR techniques, enzymatic digestion and sequencing were used to confirm the accuracy of fusion of IFNγ-bar gens within expression transporter. Using freezing and thawing method to transfer the pCAMBIA1305.1- IFNγ-bar construction into strain of LBA4404 of agrobacterium, then disc leaves was used to integrate into the genomic of tobacco plant. The transgenic plants were selected under selector condition which possess 30 mg/l of hygromycin. After the developed roots were transferred into soil, and PCR technique was used to confirm the presence of IFNγ-bar in the genomic of plants. Dot blot analysis was applied to detect IFNγ-bar protein in transgenic of to tobacco plants.
اینترفرون گامای انسانی, بیان دائم, گیاه توتون, ژن bar
Human interferon gamma, Stable expression, Tobacco plant, bar gene
27
36
http://pgr.lu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-4&slc_lang=fa&sid=1
Bahareh
Zakerghoran
بهاره
ذاکر قرآن
1003194753284600690
1003194753284600690
No
M.Sc. Student, Department of Agronomy and Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Shahid Chamran University, Ahwaz
دانشگاه شهید چمران اهواز
Hamid
Rajabi Memari
حمید
رجبی معماری
1003194753284600691
1003194753284600691
Yes
Assistant Professor, Department of Agronomy and Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Shahid Chamran University, Ahwaz
دانشگاه شهید چمران اهواز
Daryoosh
Nabati Ahmadi
داریوش
نباتی احمدی
1003194753284600692
1003194753284600692
No
Assistant Professor, Department of Agronomy and Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Shahid Chamran University, Ahwaz
دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی رامین
Marzieh
Siahmard
مرضیه
سیا مرد
1003194753284600693
1003194753284600693
No
M.Sc. Student, Department of Agronomy and Plant Breeding, Ramin Agriculture and Natural Resources University, Ahwaz
دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی رامین